Artigo técnico: produção in vitro, importante ferramenta comercial para o melhoramento genético bovino

A técnica é utilizada na produção de animais geneticamente superiores

A aplicação da biotecnologia da Produção in vitro (PIV) tem como principal objetivo a obtenção de embriões viáveis de fêmeas que não estão mais aptas a produzirem descendentes pelas técnicas convencionais.

A obtenção dos oócitos que serão utilizados na técnica pode ser feita por punção de ovário in morto. Após o abate do animal, são recolhidos seus ovários e armazenados em banho maria a uma temperatura de 30°C. Em seguida são puncionados os seus folículos com o auxílio de uma seringa agulhada. O material coletado é centrifugado e, posteriormente, depositado em uma Placa de Petri, sendo visualizado em uma lupa binocular para serem selecionados os oócitos.

Para a produção in vitro de embriões, uma das técnicas mais utilizadas para a recuperação de oócitos, no animal vivo, é a aspiração folicular transvaginal guiada por ultrassonografia. Com o auxílio de um ultrassom e um transdutor, onde é acoplada uma agulha ligada a uma bomba de vácuo. O material é coletado e encaminhado para o laboratório, lavado e em seguida, observado em uma lupa binocular para serem selecionados os oócitos.

A classificação dos oócitos é feita de acordo com a quantidade de células do cumulus oophorus e a qualidade intracelular, podendo ser de:

Grau 1: cumulus compacto, contendo mais de três camadas de células e citoplasma da célula homogêneo.

Grau 2: cumulus compacto, parcialmente presente ao redor do oócito, com menos de três camadas celulares. O citoplasma da célula possui granulações distribuídas de modo heterogêneo.

Grau 3: cumulus presente, mas expandido. O citoplasma apresenta-se contraído, degenerado, fragmentado ou apresentando vacúolos.

Desnudo: o citoplasma possui granulações homogêneas, mas as células do cumulus estão ausentes.

Atrésicos: o citoplasma possui granulações irregulares e células do cumulus enegrecidas em meio de maturação

Os oócitos selecionados, compreendidos entre o grau 1 e 3, são colocados em um meio de maturação e, em seguida, é realizada a fertilização in vitro. Após o sêmen bovino ser descongelado e diluído, sua concentração é ajustada e ele é colocado junto aos gametas femininos (oócitos) para serem fecundados. Após um período de 16 a 18 horas, os prováveis zigotos são lavados em um meio apropriado para a eliminação de possíveis fontes de contaminação e depositados em uma Placa de Petri contendo meio de cultura. Essa etapa é chamada de Cultivo in vitro (CIV).

O feeding pode ser realizado após 48 horas após a CIV, o feeding é o processo que tem por finalidade substituir o meio de cultura onde estão inseridos os embriões. Este processo é realizado em duas etapas, sendo que a segunda ocorre 48 horas após a primeira.

A análise da clivagem dos embriões em uma lupa binocular é feita depois de sete dias de iniciada a PIV. Neste estágio é comum encontrar as fases de blastocisto, blastocisto inicial, blastocisto expandido, blastocisto eclodido e até mesmo mórulas e embriões degenerados. Com exceção dos dois últimos estágios, os outros podem ser transferidos para uma receptora ou então, congelados para um uso posterior.

Fonte: Equipe CPT Cursos Presenciais / Info Escola / Débora Carvalho Meldau